通过融合P3-X20(y型、k型)肿瘤细胞与先前对NP-卵白进行过免疫的(BALB/cXC57B1/6)F1(CB6F1)小鼠的脾细胞，成功培育出数种分泌针对NP的特异性小鼠IgE抗体的杂交瘤细胞系。四个亚克隆(分别命名为 NP-E-3.57、 NP-E-15.88、 NP-E-91.58 和NP-E-95.31) 在体内进行扩增，并通过凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析等方法从腹水液中提纯了相应的大量IgE抗体。免疫学分析和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示，NP-epsilon-15.88、NP-epsilon-91.58和NP-epsilon-95.31均含有入1(或可能为入3)轻链;而NP-epsilon-3.57则含有入2轻链;NP-epsilon-95.31还表达源自P3-X20的MOPC-21k轻链。由这四种单克隆IgE抗体与附着在纸盘上的NP-BSA相互作用(NP-BSA-P)所生成的放射变应原吸附试验(RAST)滴定曲线显示，这些曲线彼此间并不重叠。对抑制4种IgE抗体与NP-BSA-P结合50%所需的NP-E-氨基己酸(NP-CAP)和4-羟基-3-碘-5-硝基苯乙基-e-氨基己酸(NIP-CAP)的相对量进行测量表明，这些抗体均为异源抗体，因为它们对NIP的亲和力似乎高于其对NP的亲和力。这些结果，连同文献中报道的其他发现，提示NP特异性lgE抗体的V区段与由相同小鼠品系产生的NP特异性IgM和IgG抗体的V区段相似。最后，体外组胺释放测定结果显示，其中两种单克隆IgE抗体能够介导被动致敏大鼠腹腔肥大细胞对抗原引发的组胺释放反应。

IgE分泌杂交细胞的筛选初步检测了分泌NP特异性lgE抗体的杂交瘤，其基础是培养上清液对随机养殖的兜帽大鼠皮肤敏感，使其对下文所述的被动皮肤过敏反应(PCA)敏感的能力。选择进:一步研究的分泌lgE杂交瘤也借助固相放射免疫分析(SPRIA)进行了鉴定。简而言之，聚乙烯微滴板(弗吉尼亚州亚历山大市Cooke实验室)的阱与150微升0-75微米的NP12-BSA在0.05 M碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液、pH9-2中连续孵育2小时;200微升PBS/5%FCS，30分钟;150微升培养上清液2小时，最后加150微升1251-山羊抗小鼠lgE[GAME;如前所述制备(Kelly等，1980)](1x106ct/min/ml)在测定缓冲液中[PBS，包含0.05 MEDTA,0-5% Tween-20 (Fisher,Fairlawn，NJ)，0.1% BSA和0-1%叠氮钠]2小时。每次进行上述孵育过程后，均需用PBS对培养板进行2至3次清洗;所有孵育均在室温下进行。完成最后一次孵育后，需吸出每个孔中的溶液，并对各独立孔进行清洗、切割，随后在贝克曼Gamma8000y计数仪上进行计数。

四种分泌lgE的杂交瘤细胞亚克隆，即NP-e-3.57NP-e-15.88、NP-e-91.58和NP-e-95.31,被选作进一步研究的对象，随后被改造为可进行大规模培养，以生成足够数量的细胞用于腹水生成。NP-e-3.57和NP-e-15.88源自一次细胞融合，而NP-e-91.58与NP-e-95.31则通过使用同一组供体脾细胞进行第二次细胞融合而获得。